Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plásmido Doble Nickase (m) EFP: sc-432163-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)EFP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa EFP (m) y el plásmido de doble nickasa EFP (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Trim25. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: EFP Anticuerpo (E-4): sc-166926
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) EFP | sc-432163-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) EFP | sc-432163-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Trim25 de ratón codifica EFP (TRIM25), una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING que regula la estabilidad de las proteínas y la señalización mediante modificaciones postraduccionales dependientes de ubiquitina. EFP participa en vías inmunitarias innatas e inflamatorias al modular la señalización de receptores de reconocimiento de patrones y las respuestas estimuladas por interferón, y también influye en el metabolismo del ARN a través de interacciones con proteínas de unión a ARN. Además de la defensa antiviral, TRIM25 se ha relacionado con la regulación del ciclo celular y las respuestas al estrés, lo que la hace relevante para estudiar el control dependiente del contexto de programas transcripcionales y de la proteostasis. La actividad alterada de TRIM25 y las redes de ubiquitinación se asocian con desregulación inmunitaria y fenotipos relacionados con el cáncer, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en investigaciones centradas en vías.
EFP El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Trim25 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Trim25. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Trim25. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Trim25 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.