Plásmido Doble Nickase (h) eEF2K: sc-402166-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)eEF2K consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa eEF2K (h) y el plásmido de doble nickasa eEF2K (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a EEF2K. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: eEF2K Anticuerpo (C-12): sc-390710
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) eEF2K | sc-402166-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) eEF2K | sc-402166-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EEF2K codifica la cinasa del factor de elongación eucariota 2 (eEF2K), una cinasa Ser/Thr dependiente de Ca2+/calmodulina que fosforila eEF2 para ralentizar la translocación ribosomal y limitar la síntesis de proteínas durante el estrés celular. Al actuar aguas abajo de redes de detección de nutrientes y energía, incluidas las vías de señalización de mTOR y AMPK, eEF2K ayuda a coordinar el control de la traducción con la autofagia y la adaptación metabólica. Esta vía influye en el crecimiento y la supervivencia celulares, así como en la plasticidad sináptica, al ajustar la traducción global y selectiva de ARNm. Se han descrito alteraciones en la actividad de eEF2K y en la fosforilación de eEF2 en respuestas al estrés asociadas al cáncer y en trastornos neurológicos y metabólicos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos.
eEF2K El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EEF2K en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EEF2K. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EEF2K. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EEF2K alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.