EDAR CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405342-ACT

EDAR kodiert den Ectodysplasin-A-Rezeptor, ein Mitglied der TNF-Rezeptor-Superfamilie, das während der Entwicklung von Haarfollikeln, Zähnen und ekkrinen Schweißdrüsen die epithelo‑mesenchymale Signalübertragung vermittelt. Die ligandenabhängige Aktivierung von EDAR rekrutiert Adapterproteine wie EDARADD, um die NF‑κB-Signalübertragung und nachgeschaltete Transkriptionsprogramme weiterzuleiten, die die Placodenbildung, die Keratinozytendifferenzierung und die Morphogenese von Hautanhangsgebilden steuern. Eine fehlregulierte Aktivität des EDAR-Signalwegs ist mit Phänotypen der ektodermalen Dysplasie und Entwicklungsanomalien verbunden, die Hautanhangsgebilde betreffen. In menschlichen Zellmodellen dient EDAR als mechanistischer Knotenpunkt zur Untersuchung der mit NF‑κB verknüpften transkriptionellen Regulation in mehrschichtigen Epithelien und Organoid-Systemen.

EDAR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen EDAR-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EDAR Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des EDAR-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der EDAR-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EDAR-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native EDAR-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EDAR-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EDAR-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem EDAR-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.