Plasmide CRISPR/Cas9 KO ECP (h): sc-404327
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- ECP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique ECP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ECP Antibody (C3): sc-517595
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO ECP (h) | sc-404327 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
RNASE3 code la protéine cationique des éosinophiles (ECP), une ribonucléase associée aux granules et libérée par les éosinophiles activés au cours des réponses immunitaires. L’ECP présente des activités antimicrobiennes et cytotoxiques et contribue au remodelage tissulaire médié par les éosinophiles via des interactions avec les membranes cellulaires, des composants de la matrice extracellulaire et la signalisation de l’immunité innée. L’expression de RNASE3 et la dégranulation sont associées à l’inflammation de type 2 et aux réponses éosinophiliques qui façonnent la biologie des muqueuses des voies respiratoires, de la peau et du tractus gastro-intestinal. Des niveaux d’ECP dérégulés sont fréquemment utilisés comme marqueur moléculaire de l’activation des éosinophiles dans la recherche sur les maladies inflammatoires, notamment l’asthme et d’autres troubles allergiques.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ECP (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RNASE3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RNASE3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RNASE3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ECP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RNASE3 pour l'étude de la signalisation de ECP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de RNASE3 essentiels à la fonction de ECP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RNASE3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le ECP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ECP plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RNASE3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le ECP plasmide HDR (h) et le ECP (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RNASE3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RNASE3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.