EAR2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404509-NIC

NR2F6 (EAR2) kodiert einen verwaisten nukleären Rezeptor, der als sequenzspezifischer Transkriptionsfaktor fungiert und ligandenunabhängige nukleäre Rezeptorsignale mit chromatinabhängiger Genregulation verknüpft. EAR2 moduliert Transkriptionsprogramme, die an der Immunhomöostase, inflammatorischen Signalübertragung und Zellschicksalsentscheidungen beteiligt sind, und überschneidet sich mit Signalwegen wie dem zytokingetriebenen JAK/STAT sowie NF-κB-regulierten Gennetzwerken – u. a. durch Bindung an Promotoren/Enhancer und Rekrutierung von Koregulatoren. In menschlichen Zellen wurde eine veränderte NR2F6-Aktivität mit fehlregulierten T‑Zell-Antworten sowie allgemeineren Prozessen der Immunonkologie und der Biologie entzündlicher Erkrankungen in Verbindung gebracht, was NR2F6 für die Untersuchung kontextabhängiger transkriptioneller Repression/Aktivierung relevant macht. NR2F6 wird zudem als Knotenpunkt genutzt, um das Crosstalk zwischen nukleären Rezeptoren zu analysieren und regulatorische Elemente zu identifizieren, die die linienspezifische Genexpression steuern.

EAR2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NR2F6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NR2F6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NR2F6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NR2F6-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.