EAR2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420216-ACT

Das Mausgen *Nr2f6* kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor EAR2 (NR2F6), einen ligandenunabhängigen Transkriptionsfaktor, der an Hormon-Response-Elemente bindet und so Genprogramme reguliert, die Differenzierung, Stoffwechsel und Immunhomöostase steuern. EAR2 ist in Signalnetzwerke nukleärer Rezeptoren eingebunden und kann Transkriptionsantworten nachgeschaltet an entzündliche Reize und Entwicklungswege modulieren, einschließlich kontextabhängiger Wechselwirkungen mit Retinoid- und Steroidrezeptor-Schaltkreisen. In Immunzellen wurde die NR2F6-Aktivität mit der Feinabstimmung der Zytokinexpression und von T‑Zell-Effektorfunktionen in Verbindung gebracht, was sie für die Untersuchung von Mechanismen der Immuntoleranz und chronischer Entzündung relevant macht. Eine fehlregulierte NR2F6/EAR2-Expression wurde in mehreren krankheitsassoziierten Transkriptionssignaturen beschrieben, was ihren Einsatz in Modellen der Krebsbiologie, Autoimmunität und Gewebeumbauprozesse unterstützt.

EAR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nr2f6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

EAR2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nr2f6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nr2f6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen EAR2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nr2f6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von EAR2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des EAR2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nr2f6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.