Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT4 (m): sc-422986
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- EAAT4 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique EAAT4, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: EAAT4 Antibody (6D9): sc-293344
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT4 (m) | sc-422986 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Slc1a6 code le transporteur d’acides aminés excitateurs 4 (EAAT4), un transporteur du glutamate à haute affinité dépendant du Na+, qui contribue à l’élimination du glutamate extracellulaire et limite la signalisation excitotoxique au niveau des synapses. Dans le SNC murin, EAAT4 est enrichi dans les neurones de Purkinje du cervelet et module la transmission synaptique en couplant la recapture du glutamate aux gradients ioniques, influençant ainsi l’excitabilité et la plasticité neuronales. En régulant la neurotransmission glutamatergique, EAAT4 s’inscrit à l’interface de voies liées à l’homéostasie synaptique, à la signalisation dépendante du calcium et aux réponses neuro-inflammatoires déclenchées par un dérèglement du glutamate. Une capacité altérée de transport du glutamate est pertinente dans des modèles de dysfonction cérébelleuse et, plus largement, dans des phénotypes associés à la neurodégénérescence où la signalisation excitatrice et l’intégrité synaptique sont perturbées.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO EAAT4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Slc1a6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Slc1a6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Slc1a6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine EAAT4.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Slc1a6 pour l'étude de la signalisation de EAAT4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Slc1a6 essentiels à la fonction de EAAT4
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Slc1a6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le EAAT4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le EAAT4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Slc1a6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le EAAT4 plasmide HDR (m) et le EAAT4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Slc1a6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Slc1a6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.