E2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423303
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- E2A El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico E2A, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: E2A Anticuerpo (Yae): sc-416
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
E2A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423303 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Tcf3 codifica el factor de transcripción E2A de tipo hélice‑bucle‑hélice básico, un regulador clave del compromiso de linaje y de los programas de diferenciación, en particular dentro de los compartimentos hematopoyético y linfoide. E2A forma dímeros que se unen a motivos E‑box para controlar redes génicas implicadas en el control del ciclo celular, la apoptosis y la sincronización del desarrollo, y se interseca funcionalmente con contextos de señalización de Notch, Wnt/β‑catenina y TGF‑β. En modelos murinos, la actividad alterada de Tcf3 perturba el desarrollo de linfocitos B y T y puede remodelar estados transcripcionales que influyen en el mantenimiento de células madre/progenitoras. La desregulación de los circuitos transcripcionales dependientes de E2A se estudia con frecuencia en el contexto de redes oncogénicas de factores de transcripción y de defectos en la maduración de células inmunitarias.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO E2A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tcf3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tcf3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tcf3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína E2A.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tcf3 para la investigación de la señalización de E2A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Tcf3 críticos para la función de E2A
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tcf3 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido E2A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido E2A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tcf3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR E2A (m) y el plásmido HDR E2A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tcf3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tcf3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.