dystrophin Plásmido CRISPR/Cas9 KO (porcine): sc-437292

Descripción general

La distrofina es una gran proteína del citoesqueleto que conecta la red intracelular de actina con el complejo de glucoproteínas asociadas a la distrofina en el sarcolema, estabilizando las fibras musculares durante la contracción. Contribuye a la integridad de la membrana y a la mecanotransducción en el músculo esquelético y cardíaco, e influye en procesos de señalización que coordinan el manejo del calcio, la señalización del óxido nítrico y las respuestas celulares al estrés. La alteración de la distrofina compromete la resistencia del sarcolema, lo que provoca daño de las miofibras, inflamación y un remodelado progresivo, y se utiliza ampliamente como punto de entrada molecular para estudiar los mecanismos de las distrofias musculares. En sistemas porcinos, la biología de la distrofina se aprovecha para modelar el desarrollo muscular, la arquitectura y vías relevantes para la enfermedad en un contexto de animales grandes.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO dystrophin (porcine) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen en líneas celulares porcine. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína dystrophin.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en para la investigación de la señalización de dystrophin, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de críticos para la función de dystrophin
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido dystrophin CRISPR/Cas9 KO (porcine) y el plásmido dystrophin CRISPR/Cas9 KO (porcine2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus . Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR dystrophin (porcine) y el plásmido HDR dystrophin (porcine2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.