Dynein HC Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400919

Descripción general

DYNC1H1 codifica la cadena pesada de la dineína citoplasmática 1, un motor basado en microtúbulos que convierte la hidrólisis de ATP en transporte dirigido hacia el extremo menos. La cadena pesada de la dineína (HC) es fundamental para el tráfico intracelular, el posicionamiento de orgánulos, la dinámica de endosomas y lisosomas, el transporte axonal y el ensamblaje y la orientación del huso mitótico mediante su actividad coordinada con dinactina y proteínas adaptadoras. Al modular el transporte dependiente de microtúbulos y los procesos de división celular, DYNC1H1 influye en el mantenimiento neuronal, la polaridad y las vías de proteostasis. La alteración genética o disfunción de la cadena pesada de la dineína se ha relacionado con mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neuromusculares, lo que la convierte en una diana clave para estudiar defectos de transporte y respuestas al estrés del citoesqueleto.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Dynein HC (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DYNC1H1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DYNC1H1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DYNC1H1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Dynein HC.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DYNC1H1 para la investigación de la señalización de Dynein HC, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DYNC1H1 críticos para la función de Dynein HC
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DYNC1H1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Dynein HC CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Dynein HC CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DYNC1H1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Dynein HC (h) y el plásmido HDR Dynein HC (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DYNC1H1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DYNC1H1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.