Plasmide CRISPR/Cas9 KO DYNC2H1 (h): sc-406180

Présentation

DYNC2H1 code la chaîne lourde de la dynéine cytoplasmique 2, principal moteur rétrograde de la machinerie de transport intraflagellaire (IFT), qui assure le trafic de l’extrémité de la cilia vers sa base. En couplant une motilité dépendante de l’ATP aux complexes IFT-A et aux complexes adaptateurs de cargaison, DYNC2H1 est indispensable à l’assemblage et au maintien des cils primaires, ainsi qu’à la transduction de signaux dépendante des cils, notamment à la dynamique de la voie Hedgehog. Une altération de DYNC2H1 compromet la structure ciliaire et modifie les sorties de signalisation du développement, ce qui relie ce gène aux ciliopathies humaines caractérisées par des phénotypes squelettiques et du développement. Ces fonctions font de DYNC2H1 un nœud utile pour étudier la biologie des cils, le transport des organites et les programmes transcriptionnels régulés par des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DYNC2H1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DYNC2H1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DYNC2H1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DYNC2H1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DYNC2H1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DYNC2H1 pour l'étude de la signalisation de DYNC2H1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DYNC2H1 essentiels à la fonction de DYNC2H1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DYNC2H1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DYNC2H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DYNC2H1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DYNC2H1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DYNC2H1 plasmide HDR (h) et le DYNC2H1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DYNC2H1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DYNC2H1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.