Plasmide Double Nickase (h) Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1: sc-400785-NIC

DVL1 code Dishevelled 1 (Dvl-1), une protéine échafaudage cytoplasmique centrale qui couple les récepteurs Frizzled aux voies de signalisation Wnt en aval. Grâce à des interactions régulées et à la phosphorylation, DVL1 coordonne les programmes transcriptionnels Wnt/β-caténine canoniques ainsi que les voies non canoniques de polarité planaire (PCP) et Wnt/Ca²⁺, qui modèlent la dynamique du cytosquelette, la polarité et la migration cellulaire. L’activité de DVL1 influence l’organisation du développement, le comportement de type « cellule souche » et l’homéostasie tissulaire, et une signalisation Wnt–Dishevelled aberrante est fréquemment associée à une prolifération et une invasion dérégulées en biologie des cancers. Ces propriétés font de DVL1 une cible utile pour disséquer les interactions entre voies, l’assemblage du signalosome et les réponses Wnt spécifiques au contexte dans les cellules humaines.

Dvl-1/Dishevelled 1/DVL1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DVL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DVL1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DVL1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DVL1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.