DTYMK Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423426

Descripción general

Dtymk codifica la quinasa de desoxitimidilato (DTYMK), una enzima citosólica esencial que fosforila dTMP a dTDP, manteniendo los reservorios de dTTP necesarios para la replicación y la reparación del ADN. Al conectar la síntesis *de novo* de timidilato con la vía de rescate de nucleótidos, DTYMK favorece la progresión de la fase S, la estabilidad genómica y el mantenimiento del ADN mitocondrial y nuclear mediante una homeostasis equilibrada de dNTP. La alteración de la disponibilidad de dTTP puede aumentar el estrés replicativo y la señalización de daño en el ADN, vinculando la función de DTYMK con vías que controlan los puntos de control del ciclo celular y la integridad cromosómica. DTYMK se ha implicado en fenotipos proliferativos y del neurodesarrollo en sistemas modelo, lo que convierte a Dtymk en un nodo útil para estudiar mecanismos de enfermedad asociados al metabolismo de nucleótidos, sin implicar resultados clínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DTYMK (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Dtymk en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Dtymk junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Dtymk tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DTYMK.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Dtymk para la investigación de la señalización de DTYMK, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Dtymk críticos para la función de DTYMK
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Dtymk para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DTYMK CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido DTYMK CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Dtymk. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DTYMK (m) y el plásmido HDR DTYMK (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Dtymk para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Dtymk definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.