DRP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400459-ACT

DNM1L codifica a proteína 1 relacionada à dinamina (DRP1), uma grande GTPase que orquestra a fissão mitocondrial e peroxissomal ao se montar nas membranas dessas organelas e constrangê-las, em coordenação com proteínas adaptadoras como MFF, MID49/51 e FIS1. Ao controlar a morfologia das organelas, a DRP1 influencia a bioenergética, a mitofagia, a sinalização de apoptose e a redistribuição das mitocôndrias durante a divisão celular e o transporte neuronal. A atividade da DRP1 integra-se a vias de resposta ao estresse e é regulada por fosforilação, SUMOilação, ubiquitinação e S-nitrosilação, conectando a sinalização celular à dinâmica mitocondrial. A desregulação da função de DNM1L/DRP1 está implicada em fenótipos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, disfunção cardiometabólica e remodelamento metabólico associado ao câncer, tornando-a um nó central para estudos mecanísticos da homeostase mitocondrial.

DRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DNM1L sem alterar a sequência de ADN subjacente.

DRP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DNM1L em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DNM1L, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de DRP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DNM1L nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de DRP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via DRP1 em células tumorais com expressão de DNM1L silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.