Plasmide Double Nickase (h) Doublecortin: sc-400033-NIC

DCX code la doublecortine, une protéine associée aux microtubules qui s’y lie et les stabilise afin de réguler la migration neuronale, la croissance des neurites et la formation des couches corticales au cours du développement cérébral. La doublecortine coordonne le remodelage du cytosquelette et le couplage entre le centrosome et le noyau, en s’intégrant aux dynamiques des microtubules qui façonnent la polarité cellulaire et le mouvement dirigé. L’altération de DCX perturbe la migration radiale et le positionnement des neurones, et des variants pathogènes sont associés à des malformations du neurodéveloppement, notamment la lissencéphalie liée à l’X et l’hétérotopie en bandes sous-corticale. En tant que marqueur de DCX et régulateur fonctionnel dans les neurones immatures, il est largement utilisé pour étudier les mécanismes de la neurogenèse, la régulation du cytosquelette et l’assemblage des circuits au cours du développement.

Doublecortin/DCX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DCX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DCX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DCX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DCX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.