Plásmido Doble Nickase (m) DOT1L1: sc-431556-NIC

Dot1l de ratón codifica DOT1L1, una metiltransferasa de histonas conservada que cataliza la metilación de la histona H3 en la lisina 79 (H3K79), vinculando el estado de la cromatina con la regulación transcripcional y procesos asociados a la replicación. La actividad de DOT1L1 sostiene programas de expresión génica implicados en la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño en el ADN y la especificación de linajes del desarrollo mediante el control epigenético de la accesibilidad de la cromatina. En contextos hematopoyéticos y embrionarios, la alteración de la metilación de H3K79 dependiente de Dot1l se ha asociado con redes transcripcionales desreguladas y una diferenciación aberrante, lo que lo convierte en un locus útil para modelar mecanismos epigenéticos relevantes para la transformación oncogénica y fenotipos del desarrollo. Dot1l también se estudia en el contexto del control, mediado por la cromatina, de la señalización inflamatoria y de las vías de estabilidad del genoma.

DOT1L1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dot1l en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dot1l. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dot1l. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dot1l alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.