Plasmide Double Nickase (m) Dok-7: sc-433041-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Dok-7 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Dok-7 Double Nickase (m) et le plasmide Dok-7 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Dok7. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Dok-7 Antibody (A-7): sc-390856
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Dok-7 | sc-433041-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Dok-7 | sc-433041-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Dok7 code Dok-7, une protéine adaptatrice essentielle à la formation et au maintien des synapses neuromusculaires, en couplant l’activation de MuSK à la signalisation en aval nécessaire au regroupement des récepteurs de l’acétylcholine. Par des interactions qui modulent la signalisation des récepteurs tyrosine kinase et l’organisation du cytosquelette, Dok-7 favorise la maturation de la membrane postsynaptique à la jonction neuromusculaire. Une altération de la fonction de DOK7 est fortement associée aux syndromes myasthéniques congénitaux et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier la défaillance de la signalisation synaptique. Dans les systèmes modèles, la perturbation de Dok-7 est utilisée pour analyser les voies qui régissent l’innervation musculaire, la stabilité synaptique et le remodelage dépendant de l’activité.
Dok-7 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dok7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dok7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dok7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dok7.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.