Plasmide Double Nickase (m) Dnmt1: sc-420033-NIC

La Dnmt1 murine code la DNA (cytosine-5)-méthyltransférase 1, la principale méthyltransférase de maintenance qui recopie, pendant la phase S, les profils de méthylation des CpG sur l’ADN nouvellement synthétisé. DNMT1 coopère avec UHRF1, PCNA et des facteurs associés à la chromatine pour préserver l’information épigénétique, façonnant les programmes transcriptionnels, l’empreinte génomique et l’inactivation du chromosome X. En stabilisant la méthylation au niveau des éléments répétitifs, DNMT1 contribue au silence des transposons et à l’intégrité du génome, reliant son activité à la réplication de l’ADN, à l’organisation de la chromatine et aux réponses aux dommages de l’ADN. Une méthylation dépendante de DNMT1 dérégulée est largement associée à des états d’expression génique altérés dans le cancer ainsi qu’à des phénotypes épigénétiques et neurodéveloppementaux dans des systèmes modèles, ce qui en fait une cible fréquente pour les études mécanistiques de la maintenance de l’épigénome.

Dnmt1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Dnmt1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Dnmt1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Dnmt1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Dnmt1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.