Plasmide CRISPR d'Activation (h) DNase I: sc-402467-ACT

L’ADNase I humaine est codée par le gène **DNASE1** ; il s’agit d’une endonucléase sécrétée qui hydrolyse l’ADN extracellulaire et contribue à l’élimination des acides nucléiques lors du renouvellement cellulaire et du remodelage tissulaire. En dégradant la chromatine libérée par des cellules apoptotiques ou nécrotiques, l’ADNase I aide à limiter la persistance d’un ADN immunostimulant susceptible d’activer les voies innées de détection des acides nucléiques et de moduler la signalisation inflammatoire. L’activité de **DNASE1** est également pertinente pour le renouvellement des pièges extracellulaires des neutrophiles (NET) et la résolution de matrices extracellulaires riches en ADN, ce qui la relie à des processus tels que l’inflammation associée à la thrombose et l’homéostasie des tissus barrières. Des altérations de l’expression ou de la fonction de **DNASE1** ont été associées à une clairance de l’ADN dérégulée et à des phénotypes auto-immuns, ce qui en fait un nœud utile pour étudier les mécanismes de tolérance au soi vis-à-vis de l’ADN et la pathologie inflammatoire.

DNase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DNASE1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DNase I Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DNASE1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DNASE1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DNase I. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DNASE1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DNase I au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DNase I dans les cellules tumorales présentant une expression de DNASE1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.