Plásmido CRISPR de Activación (h) DnaJC13: sc-411713-ACT

DNAJC13 codifica DnaJC13, una cochaperona con dominio J implicada en el tráfico mediado por clatrina y en el reciclaje endosomal, donde ayuda a coordinar el control de calidad de proteínas con la dinámica de las vesículas. La proteína se asocia con la red retromer/WASH y contribuye a decisiones de clasificación que afectan al recambio de receptores, al reciclaje de proteínas de membrana y al transporte de endosoma a Golgi. A través de estas funciones, DNAJC13 influye en la homeostasis de la señalización y en las vías de proteostasis sensibles a defectos de tráfico. Estudios genéticos y funcionales han vinculado la actividad alterada de DNAJC13 con procesos relevantes para la neurodegeneración, incluidas alteraciones de la función endolisosomal y del manejo de proteínas sinápticas.

DnaJC13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DNAJC13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DnaJC13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DNAJC13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DNAJC13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DnaJC13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DNAJC13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DnaJC13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DnaJC13 en células tumorales con expresión de DNAJC13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.