DnaJB3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420974

Übersicht

Dnajb3 kodiert DnaJB3, ein Mitglied der Hsp40/DnaJ‑Co-Chaperon-Familie, das mit Hsp70 zusammenwirkt, um die Proteinfaltung, das erneute Falten (Refolding) und die Sortierung fehlgefalteter Polypeptide zu regulieren. Über die durch seine J‑Domäne vermittelte Stimulation der Hsp70‑ATPase-Aktivität trägt DnaJB3 zur zellulären Proteostase bei und unterstützt stressresponsive Signalwege der Proteinkontrolle. Diese Prozesse greifen in Reaktionen auf Stress des endoplasmatischen Retikulums sowie in proteolytische Abbaumechanismen ein, die das Zellüberleben unter proteotoxischen Bedingungen beeinflussen. Eine veränderte Funktion des Chaperon-Netzwerks ist für Modelle metabolischer Dysfunktionen und neurodegenerativer Erkrankungen breit relevant, in denen gestörte Proteostase und Stresssignalgebung zu krankheitsassoziierten Phänotypen beitragen.

Das DnaJB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dnajb3-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dnajb3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dnajb3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die DnaJB3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dnajb3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der DnaJB3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Dnajb3-Exone abzielen, die für die DnaJB3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dnajb3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom DnaJB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom DnaJB3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dnajb3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das DnaJB3 HDR-Plasmid (m) und DnaJB3 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dnajb3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dnajb3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.