DNAH5 Double Nickase Plasmid (h): sc-407034-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DNAH5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DNAH5 Double-Nickase-Plasmid (h) und DNAH5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DNAH5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DNAH5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407034-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DNAH5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407034-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAH5 kodiert die axonemale Dynein-Schwerkette 5, eine zentrale Motor-Komponente des äußeren Dynein-Arms, der das ATP‑abhängige Gleiten von Mikrotubuli innerhalb des Axonems motiler Zilien antreibt. Im menschlichen Atemwegsepithel, im Reproduktionstrakt und in Ependymzellen unterstützt DNAH5 den koordinierten Zilienschlag, der für mukoziliäre Clearance, Flüssigkeitsströmungen und die Links‑Rechts‑Achsenfestlegung während der Entwicklung erforderlich ist. Seine Funktion ist mit Prozessen der Axonemenassemblierung und des intraflagellären Transports verknüpft, die die Ultrastruktur und das Schlagmuster der Zilien aufrechterhalten. Loss‑of‑Function‑Varianten in DNAH5 sind stark mit der primären Ziliendyskinesie assoziiert und verknüpfen eine beeinträchtigte Zilienmotilität mit chronischen Atemwegserkrankungen, Lateralisierungsdefekten und eingeschränkter Fertilität.
DNAH5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DNAH5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DNAH5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DNAH5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DNAH5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.