Plásmido Doble Nickase (h) DNA-PKCS: sc-400337-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)DNA-PKCS consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DNA-PKCS (h) y el plásmido de doble nickasa DNA-PKCS (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a PRKDC. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DNA-PKCS Anticuerpo (G-12): sc-390849
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) DNA-PKCS | sc-400337-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) DNA-PKCS | sc-400337-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKDC codifica la subunidad catalítica de la proteína cinasa dependiente de ADN, DNA-PKCS, un regulador central de la reparación de roturas de doble cadena del ADN a través de la vía clásica de unión de extremos no homóloga (c-NHEJ). Tras la unión de Ku70/Ku80 a los extremos del ADN, DNA-PKCS es reclutada y activada para coordinar la sinapsis de extremos, su procesamiento y ligación, y también contribuye a la recombinación V(D)J durante el desarrollo de los linfocitos. La señalización de DNA-PKCS se integra con redes de vigilancia del genoma, incluidas las respuestas al daño del ADN mediadas por ATM/ATR, influyendo en el control de los puntos de control del ciclo celular y en la dinámica de la cromatina. La alteración de la función o la expresión de PRKDC se asocia con una estabilidad genómica comprometida, fenotipos de radiosensibilidad y dependencias de reparación del ADN relacionadas con el cáncer, por lo que se estudia ampliamente en los mecanismos de estrés genotóxico y resistencia.
DNA-PKCS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus PRKDC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de PRKDC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de PRKDC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con PRKDC alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.