Plásmido Doble Nickase (h) DMBT1: sc-402615-NIC

DMBT1 (deleted in malignant brain tumors 1) codifica una glucoproteína secretada multidominio, rica en cisteína y perteneciente a la familia de receptores “scavenger”, implicada en la defensa del huésped a nivel epitelial y en la homeostasis de las mucosas. La proteína participa en el reconocimiento de patrones, la aglutinación de microorganismos y la modulación de la señalización inflamatoria, con funciones descritas en la diferenciación epitelial y en procesos asociados a la barrera. La expresión de DMBT1 se regula en respuesta a lesión tisular y estímulos inmunitarios, y se ha relacionado con vías que involucran la inmunidad innata, las interacciones con la matriz extracelular y la adhesión célula–célula. La alteración de la expresión de DMBT1 o su pérdida genómica se ha asociado con diversas patologías epiteliales y con la biología tumoral, lo que respalda su utilidad como diana de investigación en inflamación, biología de infecciones y mecanismos relacionados con el cáncer.

DMBT1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DMBT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DMBT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DMBT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DMBT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.