Plásmido CRISPR de Activación (h) Dlx-3: sc-405063-ACT

DLX3 codifica el factor de transcripción con homeobox Dlx-3, un regulador clave de las interacciones epitelio–mesénquima que coordina programas génicos que controlan la diferenciación epidérmica, el desarrollo del folículo piloso, la odontogénesis y la morfogénesis craneofacial. Dlx-3 participa en redes transcripcionales del desarrollo junto con otros miembros de la familia DLX e integra señales como BMP y WNT para modular la especificación de linaje y la formación de la barrera. En genética humana, la alteración de la función de DLX3 se asocia a fenotipos de displasia ectodérmica, incluido el síndrome trico-dento-óseo, lo que vincula su control transcripcional con defectos del cabello, el esmalte dental y la homeostasis ósea. Estas propiedades hacen de DLX3 un nodo relevante para estudiar estados de cromatina dependientes de la diferenciación, el uso de potenciadores específicos de tejido y los circuitos de regulación génica en queratinocitos y modelos de progenitores relacionados.

Dlx-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DLX3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dlx-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DLX3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DLX3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dlx-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DLX3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dlx-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dlx-3 en células tumorales con expresión de DLX3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.