Plasmide CRISPR d'Activation (h) DIO3: sc-403729-ACT

DIO3 code la désiodase de type III des iodothyronines (DIO3), une sélénoenzyme membranaire intégrale qui inactive les hormones thyroïdiennes en convertissant la T4 en T3 inverse (rT3) et la T3 en T2, limitant ainsi la signalisation locale des hormones thyroïdiennes. En modulant la disponibilité hormonale de façon spécifique aux tissus, DIO3 influence les programmes transcriptionnels gouvernés par les récepteurs des hormones thyroïdiennes et contribue au calendrier du développement, à l’homéostasie métabolique et à la différenciation cellulaire. L’expression de DIO3 est régulée dans des contextes tels que l’empreinte génomique et la signalisation associée à l’hypoxie, et sa dérégulation a été liée à des modifications des points d’équilibre endocriniens et du contrôle de la croissance. Dans le cancer et les troubles du développement, une activité aberrante de DIO3 est fréquemment étudiée comme un mécanisme de modification des réseaux d’expression génique dépendants des hormones thyroïdiennes au sein du microenvironnement tumoral ou au cours de l’organogenèse.

DIO3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DIO3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DIO3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DIO3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DIO3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DIO3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DIO3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DIO3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DIO3 dans les cellules tumorales présentant une expression de DIO3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.