Plasmide CRISPR/Cas9 KO DIC (h): sc-417651

Présentation

SLC25A10 code le transporteur mitochondrial des dicarboxylates (DIC), un transporteur de la membrane interne qui échange le malate et le succinate avec le phosphate inorganique, reliant les flux de métabolites mitochondriaux aux besoins biosynthétiques et redox du cytosol. En régulant la disponibilité des dicarboxylates, DIC influence l’anaplérose, l’équilibre des précurseurs gluconéogènes et lipogènes, ainsi que la coordination du cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs) avec la phosphorylation oxydative. Une activité altérée de SLC25A10 a été associée à une reprogrammation métabolique et à des réponses au stress mitochondrial, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des voies qui couplent l’utilisation des nutriments à la fonction mitochondriale. En tant que membre de la famille des transporteurs mitochondriaux, DIC offre également un levier pour analyser comment les contraintes de transport façonnent la gestion des ROS et le métabolisme prolifératif dans des modèles cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DIC (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A10, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A10 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DIC.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A10 pour l'étude de la signalisation de DIC, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A10 essentiels à la fonction de DIC
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A10 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DIC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DIC plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A10. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DIC plasmide HDR (h) et le DIC (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A10 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A10 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.