Plásmido Doble Nickase (h) DHS: sc-402858-NIC

El gen humano **DHPS** codifica la **desoxihipusina sintasa (DHS)**, una enzima esencial dependiente de **NAD** que cataliza el primer paso de la hipusinación al transferir un grupo **aminobutilo** desde la **espermidina** a **eIF5A**, generando **desoxihipusina**. Esta modificación postraduccional es necesaria para la actividad de eIF5A y favorece la elongación de la traducción, el control de la síntesis proteica y la progresión del ciclo celular, vinculando el metabolismo de las poliaminas con la proteostasis. La función de DHS se cruza con vías que regulan el crecimiento celular y las respuestas al estrés, y la alteración del eje de hipusinación **DHPS–eIF5A** se ha asociado con proliferación desregulada y fenotipos del neurodesarrollo. Dado que la hipusinación afecta la traducción selectiva de motivos difíciles de sintetizar, DHPS se estudia con frecuencia en el contexto de la reprogramación metabólica, el estrés proteotóxico y los mecanismos que mantienen la homeostasis tisular.

DHS El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DHPS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DHPS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DHPS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DHPS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.