Plásmido Doble Nickase (h) DGAT2: sc-416229-NIC

DGAT2 (diacilglicerol O-aciltransferasa 2) codifica una enzima asociada al retículo endoplásmico que cataliza el paso final y comprometido de la síntesis de triacilglicéridos mediante la acilación del diacilglicerol con acil‑CoA de ácidos grasos. Como componente central de la producción de lípidos neutros, DGAT2 favorece la biogénesis de las gotas lipídicas y se integra con el metabolismo de los glicerolípidos, el flujo de ácidos grasos y las vías de almacenamiento energético. La actividad alterada de DGAT2 se asocia con una gestión desregulada de lípidos en hígado y tejido adiposo y se ha estudiado en el contexto de mecanismos de enfermedad metabólica, incluidos la esteatosis, la remodelación lipídica asociada a la resistencia a la insulina y fenotipos relacionados con la obesidad. DGAT2 también se utiliza como un nodo funcional para investigar respuestas de estrés lipotóxico y la homeostasis del retículo endoplásmico durante una carga lipídica excesiva.

DGAT2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DGAT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DGAT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DGAT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DGAT2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.