Decorin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400786-ACT

DCN kodiert Decorin, ein sekretiertes kleines leucinreiches Proteoglykan, das an fibrilläre Kollagene bindet und die Assemblierung der extrazellulären Matrix (ECM), die Gewebebiomechanik sowie die Zell–Matrix-Adhäsion reguliert. Decorin moduliert zentrale Signalachsen, darunter TGF-β/SMAD und Rezeptor-Tyrosinkinase-Signalwege wie EGFR, und beeinflusst dadurch die Aktivierung von Fibroblasten, die Differenzierung zu Myofibroblasten und entzündliches Remodeling. Aufgrund seiner Rolle in der Kollagenfibrillogenese und der Sequestrierung von Wachstumsfaktoren wird DCN häufig in der Fibroseforschung, der Biologie des Tumormikromilieus, der Wundheilung und der Homöostase des Bindegewebes untersucht. Eine dysregulierte Decorin-Expression oder eine veränderte ECM-Organisation wurde mit pathologischem Remodeling in mehreren Organsystemen in Verbindung gebracht, was seinen Nutzen als ECM-Signalknoten in der Mechanobiologie-Forschung unterstreicht.

Decorin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen DCN-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Decorin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des DCN-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der DCN-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Decorin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native DCN-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Decorin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Decorin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem DCN-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.