Decorin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400786-ACT

DCN codifica a decorina, um pequeno proteoglicano secretado rico em leucina que se liga a colágenos fibrilares e regula a montagem da matriz extracelular (MEC), a biomecânica dos tecidos e a adesão célula–matriz. A decorina modula eixos de sinalização-chave, incluindo TGF-β/SMAD e vias de receptores tirosina-quinase como o EGFR, influenciando a ativação de fibroblastos, a diferenciação em miofibroblastos e o remodelamento inflamatório. Por meio de seus papéis na fibrilogênese do colágeno e no sequestro de fatores de crescimento, DCN é frequentemente estudado em fibrose, biologia do microambiente tumoral, reparo de feridas e homeostase do tecido conjuntivo. A expressão desregulada de decorina ou alterações na organização da MEC têm sido associadas ao remodelamento patológico em múltiplos sistemas orgânicos, sustentando sua utilidade como um nó de sinalização da MEC em pesquisas de mecanobiologia.

Decorin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Decorin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Decorin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Decorin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Decorin em células tumorais com expressão de DCN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.