Plasmide CRISPR d'Activation (h) DEC2: sc-402891-ACT

BHLHE41 code le facteur de transcription à hélice-boucle-hélice basique DEC2, un régulateur nucléaire qui se lie aux motifs E-box afin de moduler les réseaux transcriptionnels circadiens et les programmes d’état cellulaire. DEC2 intègre des signaux provenant des composants centraux de l’horloge biologique et couple l’expression génique rythmique à des processus tels que la synchronisation veille–sommeil, l’adaptation métabolique et les réponses au stress cellulaire, y compris le remodelage transcriptionnel associé à l’hypoxie. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, DEC2 a été associé à la différenciation et à la signalisation inflammatoire en façonnant les sorties transcriptionnelles en aval de signaux environnementaux. Une activité dérégulée de BHLHE41/DEC2 a été associée dans la littérature à des phénotypes de sommeil modifiés, ainsi qu’à des rôles dépendants du contexte en biologie tumorale et dans des modèles de maladies métaboliques, soutenant des études mécanistiques du contrôle transcriptionnel.

DEC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de BHLHE41 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

DEC2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus BHLHE41 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription BHLHE41, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de DEC2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus BHLHE41 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de DEC2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie DEC2 dans les cellules tumorales présentant une expression de BHLHE41 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.