Plásmido CRISPR de Activación (h) DEC-205: sc-417220-ACT

LY75 codifica DEC-205 (CD205), un receptor endocítico de lectina tipo C altamente expresado por subpoblaciones de células dendríticas y células epiteliales tímicas, donde favorece la captación eficiente y el direccionamiento de ligandos extracelulares hacia compartimentos de procesamiento de antígenos. Mediante endocitosis mediada por receptor y su entrega a las vías de MHC de clase II y de presentación cruzada, DEC-205 contribuye a moldear el cebado de células T, la tolerancia periférica y la selección tímica. Su expresión y su tráfico intracelular se relacionan con el transporte vesicular, el procesamiento dependiente de lisosomas y la biología de la sinapsis inmunológica. La manipulación antigénica disfuncional y la distribución alterada de DEC-205 se han estudiado en el contexto de la inflamación, la autoinmunidad y la modulación inmunitaria asociada a tumores como biomarcadores del estado de las células presentadoras de antígeno.

DEC-205 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LY75 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

DEC-205 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LY75 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LY75, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de DEC-205. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LY75 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de DEC-205 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía DEC-205 en células tumorales con expresión de LY75 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.