Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Plásmido Doble Nickase (m) DDX33: sc-432143-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)DDX33 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDX33 (m) y el plásmido de doble nickasa DDX33 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Dhx33. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDX33 Anticuerpo (B-4): sc-390573
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) DDX33 | sc-432143-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) DDX33 | sc-432143-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dhx33 de ratón codifica DDX33, una helicasa de ARN tipo DEAD-box implicada en la remodelación, dependiente de ATP, de complejos ARN–proteína que sustentan el metabolismo del ARN y la traducción. DDX33 se ha vinculado con la biogénesis ribosomal y la función nucleolar, influyendo en el procesamiento de ARNr y en la capacidad de síntesis proteica durante el crecimiento celular y la adaptación al estrés. A través de estas actividades, DDX33 se conecta con vías que controlan la proliferación y con salidas de señalización inmunitaria innata que dependen de un procesamiento regulado del ARN. La desregulación de la función de las helicasas de ARN es ampliamente relevante para programas oncogénicos y fenotipos inflamatorios, lo que convierte a Dhx33 en un nodo útil para estudios mecanísticos del control del estado celular centrado en el ARN.
DDX33 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Dhx33 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Dhx33. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Dhx33. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Dhx33 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.