Plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX11 (h): sc-418103

Présentation

DDX11 (hélicase 11 de type DEAD/H-box), également connue sous le nom de ChlR1, est une hélicase de l’ADN qui contribue à la stabilité du génome en favorisant la cohésion des chromatides sœurs et une réplication efficace de l’ADN. Elle participe à la réparation de l’ADN couplée à la réplication et à la progression des fourches de réplication, à l’interface avec l’établissement de la cohésion et, plus largement, avec les voies de réponse aux dommages de l’ADN. L’activité de DDX11 aide à prévenir les cassures chromosomiques et l’aneuploïdie associées au stress réplicatif, reliant ainsi sa fonction aux mécanismes qui sécurisent la ségrégation des chromosomes. L’altération génétique ou le dysfonctionnement de DDX11 est associé à des phénotypes d’instabilité génomique liés à la cohésine, notamment le syndrome de cassure de Varsovie, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des défauts de cohésion et des dommages à l’ADN associés à la réplication.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DDX11 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DDX11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DDX11, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DDX11 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DDX11.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DDX11 pour l'étude de la signalisation de DDX11, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DDX11 essentiels à la fonction de DDX11
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DDX11 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DDX11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DDX11 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DDX11. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DDX11 plasmide HDR (h) et le DDX11 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DDX11 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DDX11 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.