DDIT3/CHOP/GADD153 Double Nickase Plasmid (h): sc-400051-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das DDIT3/CHOP/GADD153 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- DDIT3/CHOP/GADD153 Double-Nickase-Plasmid (h) und DDIT3/CHOP/GADD153 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DDIT3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: DDIT3/GADD153/CHOP: sc-7351
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
DDIT3/CHOP/GADD153 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400051-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
DDIT3/CHOP/GADD153 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400051-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DDIT3 kodiert den Transkriptionsfaktor CHOP (GADD153), ein stressinduzierbares bZIP-Protein, das mit Mitgliedern der C/EBP-Familie heterodimerisiert, um während zellulären Stresses die Genexpression umzuprogrammieren. CHOP ist ein zentraler Effektor der Unfolded-Protein-Response (UPR) und integriert die PERK–eIF2α–ATF4-Signalgebung, um unter Stress des endoplasmatischen Retikulums Apoptose, Redox-Kontrolle und Proteostase zu regulieren. Über ER-Stress hinaus ist DDIT3 an integrierten Stressantwortwegen beteiligt, die mit Nährstoffmangel, oxidativem Stress und entzündlichen Signalen verknüpft sind, und beeinflusst Entscheidungen über Zellschicksal und Differenzierungsprogramme. Eine fehlregulierte CHOP-Aktivität wird mit Stoffwechselstörungen, Modellen der Neurodegeneration, entzündungsbedingten Gewebeschäden sowie onkogenen Kontexten in Verbindung gebracht, einschließlich der FUS-DDIT3-Fusion, die mit myxoidem Liposarkom assoziiert ist. Damit ist DDIT3 ein zentraler Knotenpunkt für mechanistische Studien stressadaptiver transkriptioneller Netzwerke.
DDIT3/CHOP/GADD153 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DDIT3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DDIT3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DDIT3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DDIT3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.