Plásmido Doble Nickase (m) DDC: sc-419967-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)DDC consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa DDC (m) y el plásmido de doble nickasa DDC (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Ddc. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: DDC Anticuerpo (8E8): sc-293287
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) DDC | sc-419967-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen Ddc del ratón codifica la descarboxilasa de L‑aminoácidos aromáticos (DDC), una enzima dependiente de fosfato de piridoxal que convierte la L‑DOPA en dopamina y el 5‑hidroxitriptófano en serotonina, situándose en un punto clave de la biosíntesis de neurotransmisores catecolaminérgicos e indolaminérgicos. La actividad de DDC sostiene la neurotransmisión monoaminérgica y la señalización neuromoduladora que influyen en el desarrollo neuronal, la plasticidad sináptica y la regulación neuroendocrina. En los sistemas nerviosos central y periférico, la expresión de Ddc contribuye al flujo metabólico a través de las vías de la dopamina y la serotonina, con efectos posteriores sobre el transporte vesicular, la señalización de receptores y el equilibrio del estrés oxidativo. La alteración de la función de DDC o de la disponibilidad de monoaminas es relevante para modelos experimentales de fenotipos motores y afectivos, así como para estudios de procesos neurodesarrollativos y neurodegenerativos dependientes de neurotransmisores.
DDC El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Ddc en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Ddc. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Ddc. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Ddc alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.