Plasmide CRISPR/Cas9 KO Dcun1D4 (h): sc-409238

Présentation

DCUN1D4 code Dcun1D4, un membre de la famille des protéines de type DCN1 impliquée dans la régulation de l’activité des ligases E3 ubiquitine cullin-RING via le contrôle de la neddylation des cullines. En modulant l’activation des complexes de cullines dépendante de NEDD8, Dcun1D4 peut influencer la protéostasie médiée par l’ubiquitine, la progression du cycle cellulaire et les voies de signalisation qui reposent sur un renouvellement rapide des substrats. Une activité altérée au sein de l’axe neddylation–ubiquitine est largement pertinente pour la stabilité du génome et les programmes de réponse au stress, faisant de DCUN1D4 un locus utile pour interroger la spécificité des voies au travers des processus dépendants des CRL. Un dérèglement des machineries de l’ubiquitine et de la neddylation est observé dans de multiples contextes pathologiques, ce qui soutient des études mécanistiques de DCUN1D4 dans l’homéostasie cellulaire et les perturbations des voies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Dcun1D4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DCUN1D4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DCUN1D4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DCUN1D4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Dcun1D4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DCUN1D4 pour l'étude de la signalisation de Dcun1D4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DCUN1D4 essentiels à la fonction de Dcun1D4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DCUN1D4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Dcun1D4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Dcun1D4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DCUN1D4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Dcun1D4 plasmide HDR (h) et le Dcun1D4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DCUN1D4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DCUN1D4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.