Plasmide CRISPR/Cas9 KO DBH (h): sc-402441

Présentation

La dopamine bêta‑hydroxylase (DBH) code une mono‑oxygénase dépendante du cuivre qui catalyse la conversion de la dopamine en noradrénaline au sein des vésicules sécrétoires des neurones sympathiques et des cellules chromaffines de la médullosurrénale. En contrôlant la biosynthèse des catécholamines, la DBH influence la signalisation adrénergique, les réponses neuroendocriniennes au stress et les voies en aval médiées par des RCPG, qui régulent le tonus cardiovasculaire et l’état d’éveil du système nerveux central. Des variations de l’expression de DBH ou de son activité enzymatique ont été associées à une homéostasie de la noradrénaline altérée et ont été étudiées dans le contexte de phénotypes neuropsychiatriques et de dysfonctionnements du système nerveux autonome. DBH constitue donc une cible utile pour analyser le flux au sein de la voie des catécholamines, le couplage stimulus‑sécrétion et l’équilibre des neurotransmetteurs dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DBH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DBH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DBH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DBH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DBH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DBH pour l'étude de la signalisation de DBH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DBH essentiels à la fonction de DBH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DBH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DBH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le DBH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DBH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DBH plasmide HDR (h) et le DBH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DBH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DBH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.