Plasmide CRISPR/Cas9 KO DARPP-32 (m): sc-422380

Présentation

Ppp1r1b code DARPP-32 (phosphoprotéine de 32 kDa régulée par la dopamine et l’AMPc), un intégrateur clé des signalisations dopaminergique et glutamatergique dans les neurones épineux moyens du striatum. Grâce à un mécanisme de bascule dépendant de la phosphorylation, DARPP-32 module l’activité de la protéine phosphatase-1 (PP1) et relie la signalisation AMPc/PKA à la régulation en aval de la plasticité synaptique, de la fonction des canaux ioniques et de la signalisation des récepteurs de neurotransmetteurs. Ce nœud se situe à l’intersection de voies contrôlant l’apprentissage lié à la récompense, le contrôle moteur et les réponses transcriptionnelles aux neuromodulateurs, ce qui fait de Ppp1r1b un marqueur fréquemment utilisé dans les études des circuits des ganglions de la base. Des altérations de la signalisation de DARPP-32 ont été associées à des mécanismes de maladies neuropsychiatriques et neurodégénératives, notamment une dérégulation de la signalisation dopaminergique, une plasticité inadaptée et des phénotypes comportementaux liés au stress dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO DARPP-32 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ppp1r1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ppp1r1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ppp1r1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine DARPP-32.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ppp1r1b pour l'étude de la signalisation de DARPP-32, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ppp1r1b essentiels à la fonction de DARPP-32
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ppp1r1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le DARPP-32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le DARPP-32 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ppp1r1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le DARPP-32 plasmide HDR (m) et le DARPP-32 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ppp1r1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ppp1r1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.