DAGLα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402826

Descripción general

DAGLA codifica la lipasa de diacilglicerol alfa (DAGLα), una hidrolasa de serina asociada a membrana que cataliza la hidrólisis del diacilglicerol para generar 2-araquidonoilglicerol (2-AG), un mediador lipídico endocannabinoide principal. Al controlar la producción de 2-AG, DAGLα influye en la señalización sináptica retrógrada, la activación del receptor CB1 y la modulación dependiente de la actividad de la liberación de neurotransmisores, vinculando el metabolismo lipídico con la excitabilidad y la plasticidad neuronal. La actividad de DAGLα se integra con la señalización fosfolipasa C–diacilglicerol y con redes lipídicas más amplias relacionadas con el ácido araquidónico que moldean la inflamación y las respuestas celulares al estrés. Las alteraciones del tono endocannabinoide dependiente de DAGLA se han asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y se estudian en contextos como la epilepsia, el procesamiento del dolor y la desregulación metabólica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO DAGLα (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DAGLA en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DAGLA junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DAGLA tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína DAGLα.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DAGLA para la investigación de la señalización de DAGLα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DAGLA críticos para la función de DAGLα
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DAGLA para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido DAGLα CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido DAGLα CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DAGLA. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR DAGLα (h) y el plásmido HDR DAGLα (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DAGLA para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DAGLA definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.