D53 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423478

Descripción general

Tpd52l1 codifica D53, una proteína citosólica de la familia de proteínas tumorales tipo D52 que se ha relacionado con la regulación del tráfico de membranas, la dinámica vesicular y la organización del citoesqueleto. En células de ratón, D53 se asocia con procesos que coordinan la secreción, la polaridad celular y la proliferación, y se ha descrito que interactúa con programas de señalización que moldean el comportamiento de células epiteliales y estromales. Se ha observado una expresión alterada de miembros de la familia D52 en contextos de transformación oncogénica y control anómalo del crecimiento, lo que convierte a Tpd52l1 en una diana útil para desentrañar mecanismos de progresión del ciclo celular, migración y remodelación adaptativa al estrés. La perturbación genética de Tpd52l1 facilita estudios sobre la conectividad de vías entre la maquinaria de tráfico, la señalización mitogénica y fenotipos relevantes para la biología tumoral y la homeostasis tisular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO D53 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpd52l1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpd52l1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpd52l1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína D53.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpd52l1 para la investigación de la señalización de D53, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpd52l1 críticos para la función de D53
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpd52l1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido D53 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido D53 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpd52l1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR D53 (m) y el plásmido HDR D53 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpd52l1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpd52l1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.