Plásmido CRISPR de Activación (h) D4DR: sc-402947-ACT

El gen humano **DRD4** codifica el receptor de dopamina D4 (**D4DR**), un GPCR acoplado a **Gi/o** que modula la actividad de la adenilato ciclasa, la señalización **cAMP/PKA** y los programas de fosforilación aguas abajo que determinan la excitabilidad neuronal y la transmisión sináptica. D4DR también activa vías vinculadas a **MAPK** y a **β-arrestina**, influyendo en la desensibilización del receptor, su tráfico y respuestas transcripcionales a más largo plazo frente al tono dopaminérgico. La expresión de DRD4 y la variación regulatoria se han investigado en el contexto de la función de los circuitos frontoestriatales y de fenotipos neuropsiquiátricos, lo que lo convierte en un nodo molecular útil para estudiar la dinámica de la señalización dopaminérgica. En modelos celulares, la perturbación de DRD4 puede utilizarse para explorar el acoplamiento de vías, la farmacología del receptor y las respuestas transcripcionales a la dopamina en sistemas neuronales relevantes y en sistemas heterólogos de expresión.

D4DR El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DRD4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

D4DR El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DRD4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DRD4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de D4DR. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DRD4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de D4DR en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía D4DR en células tumorales con expresión de DRD4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.