D1DR/Dopamine Receptor D1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400532-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das D1DR/Dopamine Receptor D1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- D1DR/Dopamine Receptor D1 Double-Nickase-Plasmid (h) und D1DR/Dopamine Receptor D1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf DRD1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: D1DR/Dopamine Receptor D1: sc-518273
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
D1DR/Dopamine Receptor D1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400532-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
D1DR/Dopamine Receptor D1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400532-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DRD1 kodiert den Dopaminrezeptor D1 (D1DR), einen G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der hauptsächlich an Gαs/olf koppelt, um die Adenylylcyclase zu stimulieren, cAMP zu erhöhen und PKA‑abhängige Signalwege zu aktivieren. Die D1DR‑Signalübertragung moduliert die neuronale Erregbarkeit und synaptische Plastizität durch die Regulation von Ionenkanälen, CREB‑vermittelte Transkription und Crosstalk mit MAPK/ERK‑Signalwegen. Im zentralen Nervensystem ist DRD1 eine Schlüsselkomponente der dopaminergen Neurotransmission in striatalen und kortikalen Schaltkreisen und beeinflusst Motorik, Belohnungslernen und Kognition. Eine fehlregulierte D1DR‑Signalübertragung und Rezeptorexpression werden häufig im Kontext neuropsychiatrischer und neurodegenerativer Krankheitsmechanismen untersucht, darunter Parkinson‑Krankheit und Schizophrenie sowie Anpassungen im Zusammenhang mit Substanzkonsum.
D1DR/Dopamine Receptor D1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des DRD1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von DRD1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die DRD1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit DRD1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.