Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406444

Übersicht

CARS kodiert die zytoplasmatische Cysteinyl‑tRNA‑Synthetase (CysRS), eine Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase der Klasse I, die Cystein an die zugehörige tRNA ligiert und so die Translationsgenauigkeit im Zytosol sicherstellt. Durch die Kontrolle des Angebots an beladener tRNA\(^\text{Cys}\) unterstützt die zytoplasmatische CysRS die globale Proteinsynthese und koppelt die Verfügbarkeit von Aminosäuren an Proteostase‑Signalwege, einschließlich Stressantworten, die die Translation modulieren. Störungen der Aminoacyl‑tRNA‑Synthetase‑Aktivität können die Ribosomendynamik verändern und integrierte Stress‑Signalwege aktivieren, mit nachgelagerten Effekten auf Zellwachstum, Stoffwechsel und redoxsensitive Prozesse, die von der Cysteinnutzung abhängen. Eine Dysregulation der tRNA‑Beladung und der translationsbezogenen Qualitätskontrolle ist relevant für die Forschung zu neuroentwicklungsbedingten und neuromuskulären Phänotypen, proliferativen Erkrankungen und der zellulären Anpassung an Stress.

Das Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CARS-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CARS-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CARS nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cytoplasmic CysRS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CARS-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cytoplasmic CysRS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CARS-Exone abzielen, die für die Cytoplasmic CysRS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CARS-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cytoplasmic CysRS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CARS-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cytoplasmic CysRS HDR-Plasmid (h) und Cytoplasmic CysRS HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CARS-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CARS-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.