Cytokeratin 18 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400305

Descripción general

KRT18 codifica la citoqueratina 18, una proteína de filamento intermedio de tipo I que heteropolimeriza con la queratina 8 para formar el núcleo de la red citoesquelética de las células epiteliales simples. Este sistema de filamentos sostiene la arquitectura celular y la resistencia mecánica, y se integra con los complejos de unión, el posicionamiento de orgánulos y la señalización de respuesta al estrés que coordina la progresión del ciclo celular y la apoptosis. La dinámica de la citoqueratina 18 está regulada por fosforilación y procesamiento proteolítico, lo que la vincula a la remodelación del citoesqueleto durante la mitosis y el estrés celular. La expresión desregulada de KRT18 o la organización de sus filamentos se utiliza con frecuencia como marcador del estado epitelial y se ha estudiado en contextos de lesión epitelial, inflamación y biología tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cytokeratin 18 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen KRT18 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del KRT18 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de KRT18 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cytokeratin 18.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en KRT18 para la investigación de la señalización de Cytokeratin 18, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de KRT18 críticos para la función de Cytokeratin 18
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de KRT18 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cytokeratin 18 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus KRT18. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cytokeratin 18 (h) y el plásmido HDR Cytokeratin 18 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología KRT18 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana KRT18 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.