Plásmido CRISPR de Activación (h) Cytokeratin 17: sc-402008-ACT

KRT17 codifica la citoqueratina 17, una proteína de filamento intermedio de tipo I que se ensambla con queratinas asociadas para mantener la integridad estructural de las células epiteliales y su resistencia frente al estrés mecánico. La citoqueratina 17 se regula de forma dinámica durante la reparación de heridas y en estados hiperproliferativos, vinculando la remodelación del citoesqueleto con procesos como la activación de queratinocitos, la migración celular y la diferenciación epitelial. Se ha descrito una expresión alterada de KRT17 en contextos inflamatorios y neoplásicos, donde se utiliza habitualmente como marcador de fenotipos epiteliales basales o activados. Como parte de la red de filamentos intermedios, interactúa con programas de señalización que coordinan la organización del citoesqueleto, las respuestas al estrés celular y la homeostasis tisular.

Cytokeratin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KRT17 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cytokeratin 17 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KRT17 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KRT17, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cytokeratin 17. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KRT17 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cytokeratin 17 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cytokeratin 17 en células tumorales con expresión de KRT17 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.