Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 16: sc-403138-NIC

KRT16 code la cytokératine 16, une protéine de filament intermédiaire de type I qui forme des hétérodimères avec des kératines de type II afin de construire le cytosquelette de kératine dans les épithéliums stratifiés. La cytokératine 16 est rapidement induite lors des états d’activation de l’épiderme, favorisant la résistance mécanique, le remodelage du cytosquelette et des changements coordonnés de la prolifération et de la migration des kératinocytes dans les contextes de stress de la barrière cutanée et de programmes associés à la cicatrisation. Elle interagit avec des processus d’adhésion et de réponse au stress, notamment l’organisation cytosquelette–desmosomes et la dynamique du réseau de kératine qui façonnent l’intégrité épithéliale. Une expression dérégulée de KRT16 ou un assemblage anormal des filaments est associé à des phénotypes cutanés hyperprolifératifs et à des troubles de la kératinisation, ce qui en fait une cible utile pour étudier la signalisation du stress épithélial et le remodelage du cytosquelette lié à la différenciation.

Cytokeratin 16 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT16 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT16. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT16. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT16.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.