Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cytokeratin 15: sc-401869-ACT

KRT15 code la cytokératine 15, une protéine de filament intermédiaire de type I enrichie dans les compartiments épithéliaux basaux et fréquemment utilisée comme marqueur d’états progéniteurs et « stem-like » des kératinocytes. La cytokératine 15 contribue à l’intégrité du cytosquelette, à la dynamique de l’adhésion cellule–cellule et aux réponses épithéliales au stress via l’assemblage des filaments de kératine et l’interaction avec des programmes de différenciation et de réparation tissulaire. Son expression est liée à l’homéostasie et au remodelage épithéliaux, avec des associations rapportées à des états de différenciation modifiés dans la peau et d’autres épithéliums stratifiés. Des profils d’expression dérégulés de KRT15 ont été étudiés dans des contextes d’hyperprolifération épithéliale, de plasticité des cellules tumorales et de biologie du follicule pileux, étayant son intérêt pour des études mécanistiques de l’engagement de lignée et de la régénération tissulaire.

Cytokeratin 15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KRT15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cytokeratin 15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KRT15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KRT15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cytokeratin 15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KRT15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cytokeratin 15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cytokeratin 15 dans les cellules tumorales présentant une expression de KRT15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.