Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 10: sc-400193-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 10 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cytokeratin 10 Double Nickase (h) et le plasmide Cytokeratin 10 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KRT10. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cytokeratin 10 Antibody (LH2): sc-53252
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cytokeratin 10 | sc-400193-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cytokeratin 10 | sc-400193-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KRT10 code la cytokératine 10, une protéine de filaments intermédiaires de type I qui s’associe à la kératine 1 pour former le réseau de kératines suprabasales dans les épithéliums stratifiés. Ce système filamentaire confère une résistance mécanique, soutient l’adhésion cellule–cellule associée aux desmosomes et contribue à la différenciation terminale ainsi qu’à la formation de la barrière épidermique. L’expression de KRT10 est étroitement liée aux programmes de maturation des kératinocytes et au dialogue avec des voies de différenciation dépendantes du calcium et de réponse au stress qui remodèlent le cytosquelette. L’altération génétique ou la dérégulation de l’expression de KRT10 est associée à des troubles héréditaires de la cornification, notamment l’ichtyose épidermolytique, et KRT10 est fréquemment utilisé comme marqueur d’une différenciation épithéliale modifiée dans des modèles de maladies dermatologiques.
Cytokeratin 10 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KRT10 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KRT10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KRT10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KRT10.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.