Plasmide CRISPR/Cas9 KO CYTIP (m): sc-432749

Présentation

Cytip (protéine interagissant avec la cytohésine 1) code la protéine CYTIP, un adaptateur qui régule la signalisation cytohésine/ARF GTPase et contribue à coordonner l’adhérence dépendante des intégrines ainsi que le remodelage du cytosquelette. Dans les cellules immunitaires, CYTIP participe à la signalisation « inside-out » qui module les interactions LFA-1/ICAM, influençant la motilité des leucocytes, la stabilité de la synapse immunologique et la dynamique des contacts cellule–cellule. Par ces fonctions, Cytip est associé à des voies qui contrôlent l’activation, la migration et l’infiltration tissulaire des lymphocytes, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation immunitaire et des phénotypes liés à l’inflammation. La perturbation de Cytip chez la souris est donc utile pour analyser comment la signalisation d’adhérence s’articule avec les programmes en aval de polarisation et de trafic in vivo et dans des modèles immunitaires en culture.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CYTIP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cytip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cytip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cytip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CYTIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cytip pour l'étude de la signalisation de CYTIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cytip essentiels à la fonction de CYTIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cytip pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CYTIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CYTIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cytip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CYTIP plasmide HDR (m) et le CYTIP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cytip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cytip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.